索氏提取儀測定靈芝粉中多糖含量
1 引言
靈芝多糖是靈芝中最有效的成分之一。其有多方面的藥理活性：能提高機(jī)體免疫力、加速血液微循環(huán)、提高血液供氧能力、降低機(jī)體靜止?fàn)顟B(tài)下的無效耗氧量等。其提取是采用水提醇沉淀法，該熱水提取是在索氏提取儀中完成；而含量測定使用的是苯酚-硫酸法結(jié)合紫外分光光度計(jì)，靈芝多糖在酸性環(huán)境下水解為單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，在特定波長下，以比色法測定。
2 實(shí)驗(yàn)部分
2.1 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
索氏提取儀 SOX406（濟(jì)南海能儀器股份有限公司）；紫外可見光-分光光度計(jì)i8（濟(jì)南海能儀器股份有限公司）；分析天平；離心機(jī)；干燥器；容量瓶50ml/10ml若干。
實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682中三級用水的規(guī)格，使用試劑除特殊說明外，均為分析純。
硫酸；苯酚；乙醇；葡萄糖；濾紙；脫脂棉。
2.2 實(shí)驗(yàn)步驟
1.儀器準(zhǔn)備：請參照說明書，清洗溶劑杯。
2.取樣：將樣品進(jìn)行粉碎，精確稱取樣品約2.0g左右（記為m），并用雙層濾紙包包好，放入濾紙筒內(nèi)。
3.第一階段提?。杭尤氤樘崛軇┧?/span>60mL，打開冷凝水，啟動脂肪測定儀406。設(shè)置第一階段萃取時間2h；萃取溫度140℃；實(shí)驗(yàn)結(jié)束完，將萃取液收集到燒杯內(nèi)，并用少量蒸餾水由上端萃取口分多次淋洗樣品，并入到燒杯內(nèi)，溶劑杯內(nèi)換入新的蒸餾水再次進(jìn)行萃取。再重復(fù)此操作兩次。
4.濃縮：將燒杯置于帶有石棉網(wǎng)的電爐上烘干至少量水時，在進(jìn)行水浴烘干。
5.醇沉淀：將殘?jiān)?/span>5ml水溶解，邊攪拌邊緩慢地加乙醇75ml，搖勻，在低溫環(huán)境下靜置12小時，離心，棄去上層清液，沉淀物用熱水溶解并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻。
6.苯酚溶液配制：稱取10.0g苯酚置于200ml容量瓶中，加水定容，置于棕色瓶中，避光保存。
7.葡萄糖溶液配制：稱取葡萄糖0.1g溶于100ml容量瓶中，并定容。取其中10ml溶液于100ml容量瓶中，并定容，搖勻得0.1mg/ml溶液。
8.標(biāo)準(zhǔn)曲線建立：取5個10ml容量瓶，向其中加入0.0,0.2,0.4,0.6,0.8ml葡萄糖溶液，依次加水1ml，苯酚1ml，濃硫酸5ml，振搖5min，置于40℃水浴15min，放冷定容至10ml，用紫外-可見分光光度法在490nm波長處測定其吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
9.樣品測試：取樣品0.5ml，按9中步驟進(jìn)行依次加入各種試劑，進(jìn)行測定。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上，讀出其濃度C(μg/ml)。
10.計(jì)算結(jié)果：根據(jù)藥典規(guī)定，靈芝以無水葡萄糖計(jì)，可根據(jù)如下公式進(jìn)行計(jì)算，
增重法計(jì)算提取物含量：
3 結(jié)果分析
標(biāo)準(zhǔn)曲線 C=-1.556+119.1×A
4注意事項(xiàng)
1.該實(shí)驗(yàn)每階段收集時，建議多次淋洗。
2.在萃取過程中，將樣品浸入到萃取液中，可加速萃取速度。