凱氏定氮儀測定疫苗中蛋白質(zhì)含量
1 前言
疫苗是指為了預(yù)防、控制傳染病的發(fā)生、流行，用于人體預(yù)防接種的疫苗類預(yù)防性生物制品。生物制品，是指用微生物或其毒素、酶，人或動(dòng)物的血清、細(xì)胞等制備的供預(yù)防、診斷和治療用的制劑。預(yù)防接種用的生物制品包括疫苗、菌苗和類毒素。其中，由病菌制成的為菌苗；由病毒、立克次體、螺旋體制成的為疫苗，有時(shí)也統(tǒng)稱為疫苗。不管是哪一種疫苗，里面都會(huì)含有大量蛋白質(zhì)。下面以禽流感疫苗為例，為大家介紹一下疫苗中蛋白質(zhì)含量測定的方法。
2 實(shí)驗(yàn)部分
2.1原理
疫苗中的有機(jī)態(tài)氮在濃硫酸和催化劑的共同作用下，轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮。加堿蒸餾后，用硼酸吸收后，再以硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定液進(jìn)行滴定。
2.2 儀器與試劑、器具
2.2.1 K1100F全自動(dòng)凱氏定氮儀(濟(jì)南海能儀器股份有限公司)。
2.2.2 SH420F石墨消解儀(濟(jì)南海能儀器股份有限公司)。
2.2.3 硫酸 分析純，c(HCL)=0.1mol/L，標(biāo)準(zhǔn)滴定液。
2.2.4 硼酸 分析純，質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%。
2.2.5 氫氧化鈉 分析純，質(zhì)量分?jǐn)?shù)40%。
2.2.6 溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑 將溴甲酚綠乙醇溶液(1g/L)與甲基紅乙醇溶液(1g/L)按5：1體積比臨時(shí)混合搖勻備用。
2.2.7 催化劑片 3g硫酸鉀和0.2g硫酸銅混合均勻壓片
2.2.8 50ml量筒
2.2.9 稱量瓶
2.3 實(shí)驗(yàn)部分
2.3.1取樣：精確量取2ml樣品放入消化管中，并用純水沖洗消化管壁，防止殘留，加催化劑片（或者3g硫酸鉀、0.2g硫酸銅），加入8ml濃硫酸。
2.3.2消解：利用石墨消解爐進(jìn)行消解，將消化管放在石墨爐上，蓋上排氣罩，連接廢氣吸收系統(tǒng)，消化完畢后，將消化管取下冷卻至室溫。消化過程采用曲線升溫模式，設(shè)置參數(shù)如下：
2.3.3 待消化管內(nèi)溶液冷卻至室溫后，將消化管放置于定氮儀上。定氮儀設(shè)置程序如下：
稀釋水：30ml
硼酸： 25ml
堿： 30ml
蒸餾時(shí)間：5min
2.3.4 儀器自動(dòng)滴定并給出計(jì)算結(jié)果。
3 結(jié)果與討論
式中：M-標(biāo)準(zhǔn)酸摩爾濃度（mol/L)
V總-樣品體積（mL）
V0-空白樣滴定標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量（mL）
V-樣品滴定標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量（mL），精確到小數(shù)點(diǎn)后四位
6.25是蛋白質(zhì)系數(shù)
注意事項(xiàng)
1.消解過程中要先將水分揮發(fā)完全，以防止爆沸，噴濺。