凱氏定氮儀測定大豆中蛋白質(zhì)溶解比率
1 前言
蛋白質(zhì)溶解比率，即大豆水溶性蛋白質(zhì)含量占大豆粗蛋白質(zhì)含量的百分率。水溶性蛋白質(zhì)，指的是可溶于水的蛋白質(zhì)。《GB/T 31785-2015 大豆儲存品質(zhì)判定規(guī)則》中指出蛋白質(zhì)溶解比率是大豆儲存品質(zhì)關(guān)鍵指標(biāo)之一。本實驗根據(jù)國標(biāo)給出的方法對大豆的蛋白質(zhì)溶解比率進(jìn)行測定。
2 儀器與試劑
2.1儀器
K1160全自動凱氏定氮儀，SH420F石墨消解儀，離心機(jī)，分析天平 。
2.2試劑
硫酸（分析純），20g/L硼酸溶液，溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑，40%氫氧化鈉，混合催化劑（3gK2SO4、0.2gCuSO4），0.1mol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定液。
3 實驗方法
3.1粗蛋白測定
3.1.1試樣制備
將大豆粉碎使90%以上通過60目篩。
3.1.2取樣
稱取混合均勻的樣品0.2g（精確至0.1mg）左右，加入消化管。加入混合催化劑：3g硫酸鉀，0.2g硫酸銅，沿消化管壁加入濃硫酸10mL。
3.1.3消解
3.2可溶性蛋白測定
3.2.1試樣制備
將大豆粉碎使90%以上通過60目篩。
3.2.2提取可溶性蛋白質(zhì)
稱取粉碎試樣5g（精確至0.01g，本次取5.00g）于磨口帶塞錐形瓶中，加水200mL，搖勻使均勻分散，然后在25℃~30℃溫度下震蕩2h，取出后將混合液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻后靜置1min~2min，將上層清液倒入離心管中，在轉(zhuǎn)速為1500r/min的離心機(jī)中離心10min，再將離心液用快速濾紙或玻璃纖維過濾，收集清晰濾液于錐形瓶中，即為樣品水溶性蛋白質(zhì)測定液。
3.2.3消解
吸取測定液10mL于消化管中，加入混合催化劑：3g硫酸鉀，0.2g硫酸銅，沿消化管壁加入濃硫酸10mL。
4 結(jié)果與討論
4.1實驗結(jié)果
式中50 為樣品定容稀釋倍數(shù)
4.2結(jié)論
測試結(jié)果顯示本次測試的大豆的蛋白質(zhì)溶解比率為81.74%，大于《GB/T 31785-2015 大豆儲存品質(zhì)判定規(guī)則》中規(guī)定的75%，屬宜存大豆。
參考文獻(xiàn)
[1] GB/T 31785-2015 大豆儲存品質(zhì)判定規(guī)則
[2] GB 5009.5-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)的測定[ S ] .