聚焦3.15：養(yǎng)殖海參中敵敵畏的測定方法
今年的3.15晚會“遲到”了，但沒有缺席。昨晚，推遲了4個月的3.15晚會終于來了，精裝修房施工質(zhì)量難保證、“漢堡王”使用過期食材、“趣頭條”推送非法廣告、養(yǎng)殖海參敵敵畏成箱放……今年被點名的又不少。
不看不知道，原來海參養(yǎng)殖水這么深，此次3.15晚會主要曝出了有關(guān)海參養(yǎng)殖的5大“黑幕”：
● 大量使用敵敵畏清池
● 排回大海污染環(huán)境
● 使用抗生素獸藥原粉防病
● 南方參冒充北方參
● 麥芽糊精腌泡增重
看上去全產(chǎn)業(yè)鏈沒有一處能讓人放心。這些行為不但嚴重違反了相關(guān)法規(guī)，還給環(huán)境造成了極大的危害。
關(guān)于海參養(yǎng)殖中大量使用敵敵畏這一現(xiàn)象，顯然是違法的。敵敵畏屬于農(nóng)藥，按照我國的農(nóng)藥管理條例，不能盲目擴大農(nóng)藥的使用范圍。
敵敵畏是什么？
敵敵畏（Dichlorvos）是一種著名的有機磷類的農(nóng)藥。這類農(nóng)藥的特點是便宜且高效，我國有機磷類農(nóng)藥的產(chǎn)量居世界第二。
毒性如何？
敵敵畏相比于其他的有機磷類農(nóng)藥，急性毒性算是比較大的了，也是很多其他有機磷類農(nóng)藥的代謝產(chǎn)物，屬于國家明令禁止添加的非食用物質(zhì)，長期暴露會有致癌性和神經(jīng)毒性，所以能少接觸盡量少接觸。
為了保障人民的身體健康，加強對食品安全的監(jiān)管，我國于2016年提出敵敵畏的檢測方法：GB 23200.94-2016 食品安全國家標準 動物源性食品中敵百蟲、敵敵畏、蠅毒磷殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法。
儀器與試劑
1、儀器
高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀，超聲波清洗儀，分析天平、旋渦混勻器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、離心機、均質(zhì)器。
2、試劑
乙腈，甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、環(huán)己烷、硫酸鈉、乙酸銨、符合GB/T6682的一級水、敵敵畏標準品：CAS 62-73-7，純度≥97.6%。
溶液配制：50mmol/L乙酸銨溶液：稱取0.385g乙酸銨溶于1000mL 水中。
敵敵畏標準儲備液：準確稱取適量敵敵畏標準品，用甲醇配制成濃度為100μg/mL濃度的混合標準儲備液。此溶液在0°C～4°C冰箱中避光保存，可使用3個月。
空白樣品提取液：用不含敵敵畏殘留的樣品，按照3.2制備空白樣品提取液。
敵敵畏標準工作溶液：根據(jù)需要用空白樣品提取液將標準儲備液稀釋成50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的混合標準工作溶液。置于0°C～4°C冰箱中避光保存，可使用3天。
實驗方法
1、干海參的復水
1.1預浸泡
取2只-3只干海參，稱重約10g（精確至0.01g），置于1000mL燒杯中，倒入水（水量約為海參質(zhì)量的50倍，并應浸沒參體），再蓋上表面皿，室溫浸泡24h。
1.2清洗
在浸泡液中剖開海參體，清洗海參附著的泥砂，去除嘴部石灰質(zhì)后，切成寬約5mm條狀；將海參體，泥砂及嘴部石灰質(zhì)均保留在原浸泡液中。
1.3水煮
將經(jīng)1.2處理的試樣及浸泡液于原燒杯中，蓋上表面皿，大火煮沸，然后調(diào)至小火，保持沸騰繼續(xù)煮30min，晾至室溫后，置于0℃~10℃冰箱中，放置20h。煮沸及浸泡過程中應保持水量浸沒參體。
1.4試樣
將1.3處理的浸出液及海參體全部倒入1000mL量筒中，定容至600mL，混勻。取出海參放入燒杯中，加入600mL水，按1.3的方法再水煮一次，將在冰箱放置后的海參取出，用濾紙吸去表面水分，絞碎用于藥物殘留的測定。
2、提取與凈化
2.1 準確稱取5g均勻試樣（精確到0.01g）于50mL具塞試管中，加入5g無水硫酸鈉混勻，再加入15mL二氯甲烷，用均質(zhì)器(10000r/min)均質(zhì)2min，4000r/min離心3min，將有機相轉(zhuǎn)移至100 mL梨形蒸餾瓶中，殘渣再用2×10mL二氯甲烷均質(zhì)提取二次。
2.2 離心合并有機相，于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至2mL，將樣液轉(zhuǎn)移至5mL刻度試管中，并用少量二氯甲烷洗滌梨形蒸餾瓶，合并洗滌液到刻度試管中，室溫通氮濃縮至干。定量加入1.0mL乙腈溶解殘渣，加入2mL環(huán)己烷旋渦混勻2min后，2500r/min離心3min，將下層乙腈相過0.45μm微孔濾膜后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。
3、色譜參考條件
3.1 色譜柱：柱填料為十八烷基硅烷鍵合相的色譜柱，4.6×150mm，5μm或相當者；
3.2 流動相：甲醇：50mmol/L乙酸銨；
3.3 梯度洗脫程序：
3.4 流速：0.50mL/min或根據(jù)儀器條件優(yōu)化；
3.5 柱溫：40℃；
3.6 進樣量：10μL；
3.7 離子源：電噴霧離子源；
3.8 掃描方式：正離子；
3.9 檢測方式：多反應監(jiān)測（MRM）；
3.10 質(zhì)譜參考條件
監(jiān)測離子對及電壓參數(shù)：
a) 窗簾氣（CUR）：15.00Pa；
b) 霧化氣（GS1）：40.00Pa；
c) 輔助加熱氣（GS2）：45.00L/min；
d) 碰撞氣（CAD）：7.00Pa；
e) 離子源噴霧器電壓（IS）：5000.00V；
f) 噴霧針溫度：（TEM）：550.00℃；
g) 定性離子對、定量離子對、去簇電壓、碰撞能量、碰撞室出口電壓見下表。
4、測試
分別取10μL敵敵畏標準工作液和試樣溶液，在高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀上測定敵敵畏的峰面積，用外標法計算敵敵畏殘留量。
悟空K2025高效液相色譜儀
可靠
強化可靠性設計理念，采用全球高品質(zhì)核心元器件，歷經(jīng)權(quán)威機構(gòu)可靠性驗證，確保系統(tǒng)長期穩(wěn)定運行；
精準
獨特的送液與進樣技術(shù)，結(jié)合高靈敏度檢測器與強大的數(shù)據(jù)處理軟件，確保分析結(jié)果精密準確；
友好
簡潔易用的Wookinglab界面，結(jié)合多項人性化的細節(jié)設計，使儀器的操控更加便捷高效；
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Wookinglab采用數(shù)據(jù)庫存儲模式，支持多級權(quán)限管理，具備完善的審計追蹤功能，充分滿足FDA 21 CFR Part 11要求。